细胞冻存的详细步骤

发布时间：

2023-03-23

细胞冻存是指将细胞在极低温度下保存，以便在需要时进行解冻复苏。以下是一般细胞冻存的步骤：准备冻存液：制备含有10%-20%的细胞冻存液。常用的细胞冻存液成分包括甘油、DMSO、FBS等，具体配方可以根据实验需要进行调整。

细胞冻存的详细步骤

细胞冻存是指将细胞在极低温度下保存，以便在需要时进行解冻复苏。以下是一般细胞冻存的步骤：

1.准备冻存液：制备含有10%-20%的细胞冻存液。常用的细胞冻存液成分包括甘油、DMSO、FBS等，具体配方可以根据实验需要进行调整。

2.准备细胞：将细胞培养至80%-90%的密度，收获细胞，使用PBS或其他缓冲液洗涤1-2次，以去除细胞碎片和废弃物。

3.制备细胞悬液：加入适量的冻存液，在细胞悬液中悬浮细胞，并将其均匀分配到冻存管或其他冻存容器中。

4.慢速冷却：放置细胞冻存管或其他容器，在-20℃等温慢速冷却，使细胞渐渐地降温到-80℃以下。

5.快速冷冻：放置细胞冻存管或其他容器，在盛有液氮的容器中快速冷冻，使细胞极快地降温到-196℃以下。

6.保存：将细胞冻存管或其他容器保存在液氮中，直到需要使用时进行解冻复苏。

需要注意的是，在细胞冻存的过程中，应严格按照操作规程进行，避免任何可能的误操作和污染。并且，在使用细胞冻存物时，也需要注意解冻的步骤和条件。一般来说，解冻时应尽快将细胞冻存管或其他容器放入37℃的水浴中，直到细胞完全解冻，然后再将其移植到新的培养皿中，加入适当的培养基进行培养。

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